연구성과

안녕하세요 KATR 입니다.

오늘은 ELISA 시험에 대한 소개를 하려고합니다.

ELISA란?

ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 혹은 효소결합면역흡착검사(酵素結合免疫吸着檢査)는

항체나 항원에 효소를 표지하여 효소의 활성을 측정하여 항원-항체 반응의 강도와 그 양을 정량적으로 측정하는 방법으로 현대 생명공학에서 이용되고 있으며,

엘라이사는 물질을 확인하기 위해 항체와 색깔 변화를 이용하는 시험이다. 액체 시료나 습윤 시료에서 물질의 존재(보통 항원)를 발견하기 위해

고체상 효소결합면역흡착검사를 사용한 '습식 실험' 유형의 생화학 분석의 보편적인 형식입니다.

엘라이사(ELISA)의 종류

직접 엘라이자(Direct ELISA)

항원과 반응하는 항체에 바로 효소를 결합시키는 방법

간접 엘라이자(Indirect ELISA)

항원과 결합하는 항체(1차 항체)에는 효소가 없고, 그 항체와 결합하는 항체(2차 항체)에는 효소가 결합되는 방법

샌드위치 엘라이자(Sandwich ELISA)

항원에 대한 항체를 웰(well)에 먼저 결합시킨 뒤 그 항체에 대한 항원(시료)를 결합

(출처 : 효소결합면역흡착검사 - 위키백과, 우리 모두의 백과사전)

조금 더 자세한 시험 정보 및 방법을 알아볼까요?

사용되는 Cell Line 목록

1) MRC5 (인간유래세포, 섬유아세포) / 기본 세포주

2) CCD986SK (인간유래세포주 – 주름/보습 세포) / 기본세포주

3) RAW264.7 (마우스 면역세포주 – 항염 관련 실험 진행)

4) B16F10 (마우스 흑색종 세포 – 미백관련 실험 진행)

5) HFDPC (모유두세포 – 모발시험 진행) / 가격에 + 30만원

6) L929 (마우스 섬유아세포 – 의료기기 용출 실험에 주로 사용됨)

7) 3T3L-1 (지방전구세포 – 항비만 및 당뇨 실험 진행)

* 분화유도 기간 10일 추가 필요

8) HepG2 (간암세포주 – 지방간 및 간 관련 실험 진행)

시료정보

분말(DMSO를 용매로 하여 액상형태로 용해 가능), 기기 및 Gel (배지에서 용출 가능)

농도

1) 1-3가지 농도 진행

(원하는 농도가 있다면 제시, 없으면 MTT 진행 후 적정 농도에서 진행)

* 농도가 있는 경우 (uM, mg/ml)

* 농도가 없는 경우 원액을 100%으로 두고 1%가 최대 처리 농도 (안내 필요)

항체 Kit 정보 (시험을 진행할 발현인자 선택) + 항체 Kit 비용 별도

1) 암세포 (p53, BCL-2, Caspase3)

2) 염증 반응 (1L-1α, 1L-1β, 1L-6, TNF-α, IFN-γ, TGF-β1, 1L-10)

3) 미백 (TYRP-1, TYRP-2, MITF)

4) 항주름 (MMP-1, MMP-2, MMP-3, COL1A1, pro-COL1A1)

5) 피부장벽 (FLG, AQP-3, hBD, IVL, LOR, HAS)

6) 아토피 (1L-1α, 1L-1β, 1L-6, TNF-α, IFN-γ, TGF-β1, 1L-10)

7) 항비만 (PPARγ, c/EBPa, SERB1)

kit 종류별 방식

1) Direct ELISA: 항원과 반응하는 항체에 바로 효소를 결합시켜 상용하는 방법

2) Indirect ELISA: 항원과 결합하는 1st항체에 결합 되어있는 2st 항체에 효소가 결합시키는 방식

3) Sandwich ELISA: 항원에 대한 항체를 먼저 결합시킨 뒤, 항원을 결합하여 측정하는 방식

- 민감도가 높고, 적은 양의 항원을 측정할 때 적절하다.

4) Competitive ELISA: 항체의 결합부위에 대한 2가지 항원간의 경쟁에 의해 측정됨

시험방법

* kit와 인자에 따라 실험 방법이 달라지기 때문에 포괄적 실험방법 작성

① sample 준비 (혈청, 혈장, 세포 상층액, 세포 용해물 증)

1) 혈청 : Serum separator tubes를 사용하여 샘플을 실온에서 30분동안 응고.

1,000x g에서 10분간 원심분리하고 혈청 분획을 채취하여 즉시 분석

2) 혈장 : EDTA 또는 헤파린을 항응고제로 사용하여 혈장을 수집, 샘플 채취 후 30분 이내에 4°C,

1000 × g에서 15분간 원심분리하고 혈장 분획을 채취하여 즉시 분석

3) 세포상등액 : Cell culture media를 피펫으로 취해 4°C, 1500rpm에서 20분간 원심분리

투명한 상등액을 채취하여 즉시 분석

4) 세포용해물 : 세포들을 lysis buffer에 녹이고 얼음에 30분 lysis. 14,000 x g,5분간 원심분리

상등액을 Total propein assay을 사용하여 총 단백질 농도를 정량화 후 분석

② 알려진 농도의 standards(표준물질)에 근거해 샘플의 흡광도 값을 분석하여, 샘플에 있는 analyte(분석물)의 양을 결정해야함

③ kit의 protocol대로 실험을 진행함

* 보통 coating-blocking-antigen binding-antibody detection-conjugate binding-substrate-detection의 과정을 거침

평가 특이사항

Standard 물질을 농도별로 반응하고, Standard curve와 비교하여 시료의 단백질 발현 측정

ELISA 시험은 의료 진단, 식품 안전, 환경 분석 등 다양한 분야에서 필수적인 검사법으로 활용되고 있습니다. 높은 민감도와 정량 분석이 가능하다는 장점 덕분에,

감염병 진단부터 식품 내 알레르기 검출까지 광범위하게 적용되는 중요한 시험법입니다.

저희 한국분석시험연구원에서도 ELISA 시험 접수를 받고 있으니 많은 문의 부탁드립니다^^