연구성과

안녕하세요 KATR 입니다.

오늘은 Melanin inhibition assay (멜라닌 억제 분석) 시험 정보 및 방법을 소개해드리려고 합니다.

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멜라닌 억제 분석(Melanin Inhibition Assay)은 화장품, 의약품, 기능성 원료 등의 미백 효능을 평가하는 데 사용되는 시험 방법입니다.

피부의 색소 형성 과정에서 멜라닌 합성을 억제하는 물질을 평가하는 데 중요한 역할을 합니다.

멜라닌 합성 과정과 억제 원리

멜라닌은 티로신(Tyrosine)이 티로시나아제(Tyrosinase) 효소에 의해 산화되어 생성되는 색소입니다. 이는 멜라노좀(Melanosome) 내에서 합성되며, 멜라닌의 양이 증가하면 피부가 어두워지고, 감소하면 미백 효과가 나타납니다. 멜라닌 억제제는 주로 티로시나아제의 활성을 저해하거나 멜라노좀의 성숙을 방해하여 색소 침착을 줄이는 방식으로 작용합니다.

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조금 더 자세한 시험 방법을 설명드릴게요.

Melanin inhibition assay - 체외/체내 멜라닌의 양 측정

사용되는 Cell line 목록

1) B16F10 (마우스 흑색종 세포)

2) SK-Mel-3 (인간 흑색종 세포)

시료 정보

분말 (DMSO를 용매로 하여 액상형태로 용해 가능), 기기 및 Gel (배지에서 용출 가능)

농도

1) 1-3 가지 농도 진행

(원하는 농도가 있다면 제시, 없다면 MTT 진행 후 적정 농도에서 진행)

* 농도가 있는 경우 (uM, mg/ml)

* 농도가 없는 경우 원액을 100%으로 두고 1%가 최대 처리 농도 (안내 필요)

시험 방법

① 세포는 37℃, 충분한 습도, 5% CO₂ 인큐베이션 시켜 유지한다.

② 60mm dish 에 3 X 10⁵ cells/ml 로 seeding 을 진행한 뒤 24h 뒤에 시료 treat

* alpha-MSH 100-200 nM를 시료 처리 전 처리하여 멜라닌 생성유도

Control (DMSO)/alpha-MSH/alpha-MSH + 시료 농도별 처리

③ 0, 24, 48, 72 동안 490 nm에서 상층액 흡광도를 측정하여 멜라닌 생성 억제를 확인한다.

* 배지는 가급적 phenol이 없는 non-phenol DMEM 사용을 권장한다.

④ 72 h 반응 뒤에 세포들을 회수하고 hematocytometer로 세포 수 측정 후 원심분리

⑤ 상층액을 제거하고 pellet 에 1N aOH 100 μL 또는 cell lysis buffer 로 60 ℃ 용해 후 원심분리

⑥ 상층액을 가지고 microplate reader 로 490 nm 에서 흡광도를 측정

⑦ 실제 멜라닌으로 검량선을 만들고 멜라닌의 양을 정량

평가 특이사항

세포일정수당 멜라닌 양 또는 일정단백질당 멜라닌 양으로 환산하여 공 시료약의 값과 비교

멜라닌 억제 분석의 응용 분야

화장품: 미백 기능성 화장품 원료 평가

의약품: 기미, 주근깨, 색소침착 관련 치료제 개발

천연물 연구: 미백 효능이 있는 천연물 탐색

멜라닌 억제 분석은 피부 미백 및 색소 침착 완화와 관련된 연구에 필수적인 시험 방법으로

다양한 산업 분야에서 활용되는 만큼 중요하다고 할 수 있습니다.

한국분석시험연구원에서는 Melanin inhibition assay 시험을 접수받고 있으니 많은 문의 부탁드립니다.