연구성과

안녕하세요 KATR 입니다.

오늘은 Tyrosinase inhibition assay – 체외/체내 타이로시네이즈의 양 측정 시험에 대해 알려드리려고 합니다.

Tyrosinase inhibition assay 란?

멜라닌 합성의 핵심 효소인 타이로시네이즈(Tyrosinase)의 활성을 억제하는 물질을 평가하는 시험법입니다.

주로 미백 화장품, 의약품, 식품 산업에서 활용되며, 피부 미백 성분 및 식품의 갈변 방지제를 탐색하는 데 사용됩니다.

사용되는 Cell line 목록

1) B16F10 (마우스 흑색종 세포)

​2) SK-Mel-3 (인간 흑색종 세포)

시료정보

분말 (DMSO를 용매로 하여 액상형태로 용해 가능), 기기 및 Gel (배지에서 용출 가능)

​

농도

1) 1-3가지 농도 진행

(원하는 농도가 있다면 제시, 없으면 MTT 진행 후 적정 농도에서 진행)

* 농도가 있는 경우 (uM, mg/ml)

* 농도가 없는 경우 원액을 100 %으로 두고 1%가 최대 처리 농도 (안내 필요)

시험방법

① 세포는 37 ℃, 충분한 습도, 5 % CO₂ 인큐베이션 시켜 유지한다.

② 60 mm dish에 6 X 10⁵ cells/ml로 seeding을 진행한 뒤 24 h 뒤에 시료 treat

* Tyrosinase 100-200 nM를 시료 처리 전 처리하여 tyrosinase 생성유도

* Control (DMSO)/tyrosinase/tyrosinase + 시료 농도별 처리

③ 24시간 뒤 배양된 세포를 wash 및 회수하고 원심 분리하여 펠렛(pellet)을 얻는다

* 배지는 가급적 phenol이 없는 non-phenol DMEM 사용을 권장한다.

④ 펠렛(pellet)에 1% 트리톤 X-100(Triton X-100)을 포함하는 10 mM 인산완충생리식염수(PBS)(pH 7.0) 100 μL와 원심분리 하여 얻어진 상층액 40 μL를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 혼합함.

⑤ 37℃에서 1 h 반응시킨 뒤 475 nm에서 흡광도 측정

평가 특이사항

공 시료액 또는 tyrosinase유도 군의 tyrosinase의 흡광도 값과 비교

Tyrosinase inhibition assay - 체외/체내 타이로시네이즈의 양 측정시험법은 피부 미백 화장품, 색소 침착 치료제, 식품의 갈변 방지 연구 등 다양한 분야에서 중요한 역할을 하고 있습니다.

특히, 자연 유래 성분을 활용한 효소 저해제 개발이 활발히 이루어지고 있어,

앞으로 더 안전하고 효과적인 제품들이 기대가 되는데요,

미백 성분 연구나 관련 제품에 관심이 있다면, 오늘 설명드린 시험의 활용이 필수적이라고 볼 수 있습니다.

한국분석시험연구원에서는 Tyrosinase inhibition assay 시험접수를 받고 있으니 많은 문의 부탁드립니다.

​