연구성과

표준평판계수

표준평판계수(Standard plate count, SPC)는 시료 내 세균수를 세는 가장 일반적인 방법입니다.
시료를 희석바탕값에 따라 희석한 다음
희석액을 배지에 접종하여 24~48시간 동안 배양 후 집락수를 계수합니다.
이때 세균의 단일세포가 분열하여 평판 위에서 colony를 형성하는 종말점까지
세균세포가 희석되었다고 가정하며, 시료원액의 세균수는 집락수에 희석률을 곱하여 산출해 냅니다.

→ 표준평판계수는 이전 글인 배지의 제조 및 접종에서 평판배지를 이용하여 세균수세는 방법입니다.
크게 어렵지 않은 방법이지만 희석액 제조나 결고 산출 부분에서 다소 어려울 수도 있습니다.
표준평판계수는 시험용액의 제조, 희석시료의 준비, 시험조작,
집락수 산정, 세균수의 기재보고로 나누어 자세히 알려드리도록 하겠습니다. 

시험용액의 제조

미생물검사용 시료는 25g(㎖)을 대상으로 검사함을 원칙으로 합니다.
예를 들어 미생물 정성시험을 할 때 5개의 시료에서 각각 채취한 25g(㎖)을 검사하거나
5개의 시료에서 25g(㎖)씩 채취하여 섞은 125g(㎖)을 검사 할 수 있습니다,
채취한 검체는 희석액을 사용하여 필요에 따라 10배,100배,1000배 등
단계별 희석용액을 만들어 사용할 수 있으며,
희석액은 멸균생리식염수(0.85% NaCl), 멸균인산완충용액(PBS) 등을 사용 할 수 있습니다.
검사검체에 따라 다음과 같이 시험용액을 제조합니다.

액상검체: 채취된 검체를 강하게 진탕하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다.

반유동상검체: 채취된 검체를 멸균 유리봉 또는 시약스푼 등으로 잘 혼합한 후
그 일정량(10~25㎖)을 멸균용기에 취해 검체 양의 9배 양의 희석액과 혼합한 것을 시험용액으로 한다.

분말상검체: 검체를 멸균 유리봉과 멸균 시약스푼 등으로 잘 혼합한 후
그 일정량(10~25g)을 멸균용기에 취해 반유동상검체와 마찬가지로
검체 양의 9배 양의 희석액과 혼합한 것을 시험용액으로 한다.

→ 시험용액의 제조는 액상, 반유동상, 분말상 검체 이외에도
고체, 고체표면, 버터와 아이스크림류, 캡슐제품류, 냉동식품류, 식기류 등
검사검체에 따라 제조 방법이 정해져 있습니다.
위의 글은 일부만 기재 하였으며,
시험용액의 제조같은 경우는 시험하시는 검체의 종류에 따라 식품공전을 참고하시면 좋을 것 같습니다.

희석시료의 준비 (10배 단계 희석)
10배 단계 희석은 시료 1 : 희석액 9 (1:9 )로 제조됩니다.

1. 제조법에 따른 시험용액을 준비한다. (시험용액의 제조 참고)
2. 희석액 (0.85% NaCl or PBS)을 준비한다.
3. 희석액 90㎖를 100㎖ 메스실린더를 이용하여 측정한 후 각각 5개의 tube에 넣는다.
4. 각각 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 으로 라벨링 한다.
5. 10㎖ 피펫을 이용하여 피펫팅을 실시하여 시험용액을 균일하게 한 후
시험용액 10㎖를 채취하여 희석액을 담은 10-1 tube에 첨가한다.
6. 약 7초간 25번 진탕한다.
7. 새 10㎖ 피펫을 이용하여 피펫팅을 실시하여 10-1 tube의 시료를
균일하게 한 후 10㎖를 채취하여 10-2 tube에 첨가한다.
8. 약 7초간 25번 진탕한다.
9. 새 10㎖ 피펫을 이용하여 피펫팅을 실시하여 10-2 tube의 시료를
균일하게 한 후 10㎖를 채취하여 10-3 tube에 첨가한다.
10. 약 7초간 25번 진탕한다.
11. 새 10㎖ 피펫을 이용하여 피펫팅을 실시하여 10-3 tube의 시료를
균일하게 한 후 10㎖를 채취하여 10-4 tube에 첨가한다.
12. 약 7초간 25번 진탕한다.
13. 새 10㎖ 피펫을 이용하여 피펫팅을 실시하여 10-4 tube의 시료를
균일하게 한 후 10㎖를 채취하여 10-5 tube에 첨가한다.
14. 약 7초간 25번 진탕한다.
15. 준비된 시료로 시험을 시행한다.